蛋白樣品制備是許多實驗重要的第一步,蛋白樣品由于其結構特性各異,又必須使其完全溶解和盡可能少的化學修飾,所以不可能有一個通用的技術,只能通過大量的實驗來積累經驗。正如開篇所引用的兩句話中包含的深意:在研究蛋白的過程中,既需要嚴謹的技術流程,規范的操作手段來確保蛋白研究的完整性,也需要將其看成是獨特而奇妙的個體,結合以往經驗但又不拘泥于經驗,才能真正揭開她神秘的面紗。2012年讓我們一起來回顧一下這一重要技術及值得關注的產品。
1.為什么要進行樣品制備
“為什么要進行樣品制備?電泳的目的不就是分離嗎?"剛接觸雙向電泳的小菜鳥有可能就會這么問。這個問題很好回答,這是由于目前雙向電泳一般只能分辨到1000-3000個蛋白質點(spot),而樣品中的蛋白種類可達到10萬種以上,因此樣品的預分離制備是必須的。另外比如像對臨床組織樣本進行研究,尋找疾病標記的蛋白質組學研究目的,由于臨床樣本都是各種細胞或組織混雜,而且狀態不一,如腫瘤組織中,發生癌變的往往是上皮類細胞,而這類細胞在腫瘤中總是與血管、基質細胞等混雜。所以常規采用的癌和癌旁組織或腫瘤與正常組織進行差異比較,實際上是多種細胞甚至組織蛋白質組混合物的比較,而蛋白質組研究的通常是單一的細胞類型,因此需要進行有效的樣品制備。環保材料組裝是干什么的
但是為什么要進行不同步驟的樣品制備呢?這不僅僅是由于蛋白本身不同,所以需要不同方法來配合,而且在制備樣品的時候,首先需要明確的是什么是實驗的最終目的:是分離盡可能多的蛋白還是分離樣品中某些感興趣的蛋白,這些直接決定了你的制備方法,也決定了實驗的成功與否。
2.G Biosciences 小貼士:制備的原則:
1.?應使所有待分析的蛋白樣品全部處于溶解狀態(包括多數疏水性蛋白),且制備方法應具有可重現性。
3.?防止在樣品制備過程中發生樣品的抽提后化學修飾(如酶性或化學性降解等)。
以上這五項原則是科學家們的經驗智慧總結,基本上可以說是囊括了樣品制備過程中的抽象注意事項,之后還會提到具體的注意事項。環保材料組裝是干什么的要想毫發無損的通過這一關,首先就要分析樣品的來源,是易碎的細胞還是堅硬的組織?是植物細胞還是真菌?要做到有的放矢,才能事半功倍。
破碎的方法有許多種,包括循環凍融法、滲透法、去污劑法、酶裂解法、超聲波法、高壓法、液氮研磨法、機械勻漿法和玻璃珠破碎法等(可以歸納為機械法、化學法和物理法),這些方法有不同的應用范圍,基本的原則都是要以最小的限度減少蛋白水解和其它形式的蛋白降解變性,這也就是在樣品制備破碎這一步的關鍵所在。抑制蛋白酶降解,減少操作過程溫度或者其他物理化學條件對蛋白質變性的影響,減少核酸污染對后繼電泳等分析的污染,都是破碎過程需要考慮的問題。環保材料組裝是干什么的
除此之外,為了達到更好的后續抽提效果,G Biosciences發明了一種用于樣本研磨的小工具,或許可以給你帶來事半功倍的效果。
華雅思創生物—G-Biosciences全國授權代理
華雅思創生物子公司—重慶市華雅干細胞技術有限公司于2013年成立于重慶市北部新區,注冊資金200萬,是中國中西部地區家專業從事生物技術產品銷售、干細胞基礎研究、臨床應用研究及干細胞技術服務的生物高科技企業。環保材料組裝是干什么的
重慶市華雅干細胞技術有限公司(HY StemCell)是一家專業從事干細胞基礎研究、干細胞再生醫學臨床應用研究及干細胞技術服務的生物高科技企業。
云標簽:環保材料組裝是干什么的
文章標題:蛋白樣品制備詳解—概念篇(環保材料組裝是干什么的)
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